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金鐵鎖毛狀根的誘導和液體培養技術

金鐵鎖毛狀根的誘導和液體培養技術

作者:師大云端圖書館 時間:2019-06-01 分類:碩士論文 喜歡:1025
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【摘要】金鐵鎖(Psammosilenetunicoides)是中國西南地區特有的珍稀瀕危藥用植物,具有鎮痛、抗炎、止血、免疫調節等功效,有極高的藥用價值。通過發根農桿菌誘導藥用植物外植體產生毛狀根,然后進行液體培養,無論在生物量的增加、藥用有效成分的積累還是生產穩定性方面,都顯示了獨特的優越性。因此,利用毛狀根培養的方式獲得天然活性成分,己經成為藥用植物細胞工程領域的研究熱點。本研究利用發根農桿菌ACCC10060侵染金鐵鎖幼葉及莖段,通過對外植體的選擇、菌液濃度、侵染時間、預(共)培養時間、除菌條件的優化,建立金鐵鎖毛狀根的培養體系,然后將轉化的毛狀根在不含激素的培養基上快速培養,并進行參數測定和形態觀察分析。主要結果如下:1、根據毛狀根誘導率對外植體(葉片、莖段)進行篩選,發現經過48小時預培養后,幼嫩葉片比莖段的誘導率高;轉化的毛狀根具有激素自養和抗卡那霉素的特性,并且組織中含有冠癭堿,表明誘導的毛狀根屬于發根農桿菌侵染外植體后產生的轉化根。2、在共培養基中加入乙酰丁香酮(AS)可明顯提高金鐵鎖毛狀根誘導率,AS濃度為20mg·L-1時,其誘導率最高為69%。3、在共培養后外植體的除菌過程中,在B5培養基中添加500mg·L-1頭孢噻肟鈉抑菌效果最佳,除菌率達83%。4、誘導的毛狀根在B5無激素固體培養基中生長到2-3cm時,轉入無激素的1/2MS液體培養基中培養,35d后金鐵鎖毛狀根生物量增加了14.11倍(鮮重)和8.39倍(干重);其總皂苷含量為0.857%(干重),愈傷組織和原植物中分別為0.388%,0.217%。5.制備的金鐵鎖毛狀根表現出激素自主、生長速度快、多分支等特點,適合后續毛狀根規模化培養。
【作者】李景濱;
【導師】張宗申;
【作者基本信息】大連工業大學,發酵工程,2011,碩士
【關鍵詞】金鐵鎖;發根農桿菌;毛狀根;

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